Pecyn Canfod Asid Niwcleig Coronafeirws (SARS-Cov-2) Newydd
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flumwynscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Pecyn Canfod Asid Niwcleig Coronafeirws (SARS-Cov-2) Newydd (Dull Ymchwilio RT-PCR fflwroleuol)
【Packaging specifications 】25 Prawf/Kit
【Intended usoed】
Defnyddir y pecyn hwn ar gyfer canfod ansoddol asid niwclëig o coronafirws newydd mewn swabiau nasopharyngeal, swabiau oroffaryngeal (gwddf), swabiau trwynol blaen, swabiau canol-tyrbinad, golchiadau trwynol a sbigiau trwynol gan unigolion yr amheuir eu bod yn dioddef o COVID19 gan eu darparwr gofal iechyd. Gellir defnyddio canfod genynnau ORF1ab ac N o'r coronafirws newydd ar gyfer diagnosis ategol a monitro epidemiolegol o haint coronafirws newydd.
【Principles of the procedure 】
Mae'r pecyn hwn wedi'i gynllunio ar gyfer stilwyr TaqMan penodol a phremwyr penodol sydd wedi'u cynllunio ar gyfer y dilyniannau genynnau coronafirws newydd (SARS-Cov-2) ORF1ab ac N. Mae'r datrysiad adwaith PCR yn cynnwys 3 set o breimwyr penodol a stilwyr fflwroleuol ar gyfer canfod targedau penodol, a defnyddir set ychwanegol o breimwyr penodol a stilwyr fflwroleuol fel rheolaeth safonol fewnol y pecyn ar gyfer canfod genynnau cadw tŷ mewndarddol.
Egwyddor y prawf yw bod y stiliwr fflwroleuol penodol yn cael ei dreulio a'i ddiraddio gan weithgaredd exonuclease yr ensym Taq yn yr adwaith PCR, fel bod grŵp fflworoleuol y gohebydd a'r grŵp fflwroleuol diffodd yn cael eu gwahanu, fel bod y system monitro fflworoleuedd yn gallu derbyn fflwroleuedd. signal, ac yna Trwy effaith cyfoethogi ymhelaethu PCR, mae signal fflworoleuedd y stiliwr yn cyrraedd trothwy gwerth-Ct gwerth trothwy penodol (Trothwy Beicio). Yn achos dim amplicon targed, mae grŵp ohebwyr y stiliwr yn agos at y grŵp diffodd. Ar yr adeg hon, mae trosglwyddo egni cyseiniant fflworoleuedd yn digwydd, ac mae fflworoleuedd y grŵp adroddwr yn cael ei ddiffodd gan y grŵp diffodd, fel na all yr offeryn PCR fflwroleuol ganfod y signal fflwroleuol.
Er mwyn monitro'r defnydd o adweithyddion yn ystod y prawf, mae gan y pecyn reolaethau cadarnhaol a negyddol: mae'r rheolaeth gadarnhaol yn cynnwys plasmid ailgyfunol y safle targed, a'r rheolaeth negyddol yw dŵr distyll, a ddefnyddir i fonitro llygredd amgylcheddol. Argymhellir gosod rheolaeth gadarnhaol a rheolaeth negyddol ar yr un pryd wrth brofi.
【Main components 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Componentau | |
Name | Specification | Cwantity | Cwantity | |
Rheolaeth gadarnhaol | 180 μL/ffial | 1 | 1 | Plasmidau wedi'u hadeiladu'n artiffisial, Dŵr distyll |
Rheolaeth negyddol | 180 μL/ffial | 1 | 1 | Dŵr distyll |
Cymysgedd SARS-Cov-2 | 358.5 μL/ffial | 1 | / | Parau preimio penodol, stilwyr fflwroleuol canfod penodol, dNTPs, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, dŵr distyll, ac ati |
Cymysgedd Ensym | 16.5 μL/ffiol | 1 | / | Ensymau Taq, transcriptase gwrthdro, ensymau UNG, ac ati. |
Cymysgedd SARS-Cov-2 (Lyophilised) | 25 prawf/ffiol | / | 1 | Parau preimio penodol, stilwyr fflwroleuol canfod penodol, dNTPs, ensymau Taq, trawsgrifiad gwrthdro, dŵr distyll, ac ati. |
Clustog 2x | 375 μL/ffial | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Dŵr distyll, ac ati. |
Nodyn:(1) Ni ellir cymysgu na chyfnewid y cydrannau mewn gwahanol becynnau swp.
(2) Paratowch eich adweithydd eich hun: Pecyn echdynnu asid niwcleig.
【Storage conditions a expiration date 】
For BST-SARS-25:Cludo a storio ar -20 ± 5 ℃ am amser hir.
For BST-SARS-DR-25:Cludiant ar dymheredd ystafell. Storio ar -20 ± 5 ℃ am amser hir.
Osgoi cylchoedd rhewi-dadmer dro ar ôl tro. Mae'r cyfnod dilysrwydd wedi'i osod yn betrus am 12 mis.
Gweler y label am y dyddiad gweithgynhyrchu a'r dyddiad defnyddio.
Ar ôl ei agor gyntaf, gellir storio'r adweithydd ar -20±5 ° C am ddim mwy na 1 mis neu hyd at ddiwedd cyfnod yr adweithydd, pa bynnag ddyddiad sy'n dod gyntaf, er mwyn osgoi cylchoedd rhewi-dadmer dro ar ôl tro, a nifer y rhewi adweithydd. -ni ddylai cylchoedd dadmer fod yn fwy na 6 gwaith.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
Math o sampl 1.Applicable: Toddiant asid niwclëig wedi'i dynnu.
2.Sample storio a chludo: Storio ar-20 ± 5 ℃ am 6 months.Freeze a dadmer y samplau dim mwy na 6 gwaith.
【Testing method】
1.Nucleic acid extraction
Dewiswch becyn echdynnu asid niwclëig addas i echdynnu asid niwclëig firaol, a dilynwch gyfarwyddiadau'r pecyn cyfatebol. Argymhellir defnyddio pecyn echdynnu a phuro asid niwcleig a gynhyrchwyd gan Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co, Ltd neu becyn puro asid niwclëig cyfatebol.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Tynnwch y Cymysgedd SARS-Cov-2 a Chymysgedd Ensym, toddi yn gyfan gwbl ar dymheredd ystafell gymysgu'n drylwyr gan ddyfais Vortex ac yna centrifuge yn fyr.
(2) Ychwanegwyd Cymysgedd Ensym 16.5uL i 358.5uL SARS-Cov-2 Mix a'i gymysgu'n drylwyr i gael yr ateb adwaith cymysg.
(3) Paratowch tiwb octal PCR glân 0.2 mL a'i farcio â 15uL o'r ateb adwaith cymysg uchod fesul ffynnon.
(4) Ychwanegwch 15 μL o doddiant asid niwclëig puro, y rheolaeth gadarnhaol a'r rheolaeth negyddol, a gorchuddiwch y cap tiwb wythol yn ofalus.
(5) Cymysgwch yn dda trwy wrthdroi wyneb i waered, a centrifuge yn gyflym i ganolbwyntio'r hylif ar waelod y tiwb.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) Ychwanegu Clustog 375ul 2x i Gymysgedd SARS-Cov-2 ((Lyophilised) i baratoi'r cymysgedd adwaith. Cymysgwch yn drylwyr trwy bibellu ac yna centrifuge yn fyr. ( Unwaith y bydd cymysgedd adwaith wedi'i baratoi, argymhellir ei storio ar -20 ℃ ar storio tymor hir.)
(2) Paratowch tiwb octal PCR glân 0.2 mL a'i farcio â 15μL o gymysgedd adwaith fesul ffynnon.
(3) Ychwanegwch 15μL o hydoddiant asid niwclëig puro, y rheolaeth gadarnhaol a'r rheolaeth negyddol, a gorchuddiwch y cap tiwb wythol yn ofalus.
(4) Cymysgwch yn dda trwy wrthdroi wyneb i waered, a centrifuge yn gyflym i ganolbwyntio'r hylif ar waelod y tiwb.
3. PCR amplification (Cyfeiriwch at y llawlyfr offeryn ar gyfer gosodiadau gweithredu.)
3. 1 Rhowch y tiwb PCR 8-i mewn i siambr sampl yr offeryn PCR fflwroleuol, a gosodwch y sampl i'w brofi, y rheolaeth gadarnhaol a'r rheolaeth negyddol yn ôl y drefn lwytho.
3.2 Sianel canfod fflworoleuedd:
(1) Mae genyn ORF1ab yn dewis sianel ganfod FAM (Gohebydd: FAM, Quencher: Dim).
(2) Mae genyn N yn dewis sianel ganfod VIC (Gohebydd: VIC, Quencher: Dim).
(3) Mae genyn safonol mewnol yn dewis sianel ganfod CY5 (Gohebydd: CY5, Quencher: Dim).
(4) Mae'r Cyfeirnod Goddefol wedi'i osod i ROX.
3.3 Gosodiad paramedr rhaglen PCR:
Cam | Tymheredd (℃) | Amser | Nifer y cylchoedd | |
1 | Adwaith trawsgrifio gwrthdro | 50 | 15 mun | 1 |
2 | Taq actifadu ensymau | 95 | 2.5 mun | 1 |
3 | Taq actifadu ensymau | 93 | 10 s | 43 |
Estyniad anelio a chaffael fflworoleuedd | 55 | 30 s |
Ar ôl ei osod, cadwch y ffeil a rhedeg y rhaglen adwaith.
4.Results analysis
Ar ôl i'r rhaglen ddod i ben, caiff y canlyniadau eu cadw'n awtomatig, a dadansoddir y gromlin ymhelaethu. Mae'r gromlin ymhelaethu wedi'i gosod i'r trothwy rhagosodedig offeryn.
【Explanation of test results 】
1. Penderfynwch ar ddilysrwydd yr arbrawf: Dylai fod gan y FAM rheolaeth gadarnhaol, sianel VIC gromlin ymhelaethu nodweddiadol, ac mae'r gwerth Ct yn gyffredinol yn llai na 34, ond gall amrywio oherwydd gosodiadau trothwy gwahanol offerynnau gwahanol. Dylai'r FAM rheolaeth negyddol, sianel VIC fod heb ei chwyddo Ct. Cytunir bod yn rhaid bodloni'r gofynion uchod ar yr un pryd, fel arall mae'r prawf hwn yn annilys.
2. Barn canlyniad
sianel FAM/VIC | Canlyniad y farn |
Ct<37 | Prawf sampl yn bositif |
37≤Ct<40 | Mae'r gromlin ymhelaethu yn siâp S, ac mae angen ail-archwilio samplau amheus; os yw canlyniadau'r ailarholiad yn gyson, fe'i bernir yn gadarnhaol, fel arall mae'n negyddol |
Ct≥40 Neu Dim Ymhelaethiad | Prawf sampl yn negyddol (neu'n is na'r terfyn isaf o ganfod cit) |
Nodyn: (1) Os yw'r sianel FAM a'r sianel VIC yn bositif ar yr un pryd, mae'r SARS-Cov-2 yn benderfynol o fod yn bositif.
(2) Os yw'r sianel FAM neu sianel VIC yn bositif ac mae'r sianel arall yn negyddol, dylid ailadrodd y prawf. Os yw'n bositif ar yr un pryd, bydd yn cael ei farnu fel SARS-Cov-2 positif, fel arall bydd yn cael ei farnu fel SARS-Cov-2 negyddol.